Western blotting vs ELISA
Vad är skillnaden på dessa? Vid WB så tillsätts väl både primära och sekundära antikroppar som binder till proteinet, varav de primära binder till proteinet och de sekundära till primära antikroppar. Vid ELISA så sitter det proteinet vid botten i en brunn och proteinet binder in. Därefter tillsätts sekundära antikroppar som binder till proteinet. Jag förstår inte vad skillnaden är, förutom att de sekundära antikropparna binder till antingen primära antikroppar eller till proteinet. Vad är skillnaden i övrigt och när används respektive metod? Det står att ELISA används för att kvantifiera ett protein, men jag vet inte heller helt vad som menas med detta. Det är väl ELISA som används i graviditetstester, hur är dessa kvantitativa?
Det var en många frågor på en gång, vi börjar från början..
sund20 skrev:Vad är skillnaden på dessa? Vid WB så tillsätts väl både primära och sekundära antikroppar som binder till proteinet, varav de primära binder till proteinet och de sekundära till primära antikroppar. Vid ELISA så sitter det proteinet vid botten i en brunn och proteinet binder in. Därefter tillsätts sekundära antikroppar som binder till proteinet. Jag förstår inte vad skillnaden är, förutom att de sekundära antikropparna binder till antingen primära antikroppar eller till proteinet. Vad är skillnaden i övrigt och när används respektive metod?
Western blott görs efter (SDS) eller nativ PAGE, så då har du redan storleksseparerat proteinerna på gelen. Sedan blottas proteinbanden över till membranet, och antikropparna används för att identifiera vilket proteinband som är det du letar efter (d.v.s. det protein som antikroppen binder till). Du kan t.ex. identifiera om och (med hyffsad precision) hur mycket det finns av ett eller flera kända proteiner i en komplex blandning av proteiner, ofta hela cellens proteininnehåll.
I ELISA sker allt med protein i lösning, och du kan enklare kvantifiera hur mycket det finns av ett specifikt protein.
Det står att ELISA används för att kvantifiera ett protein, men jag vet inte heller helt vad som menas med detta.
Vid ELISA fås en viss intensitet från ett prov, och intensiteten kan bestämmas med hög precision. Denna intensitet är proportionell mot koncentrationen av proteinet som finns i provet. Om det finns lite av proteinet i provet, kommer lite fastna i plattan (som ELISA görs i) och då kan lite antikropp binda - och intensiteten är proportionell till koncentrationen av antikroppen. Finns det mer protein i provet, blir det mer antikropp bunden och högre intensitet.
Så med hjälp av en kallibreringskurva gjord med kända koncentrationer av proteinet kan intensiteten i provet översättas till proteinets koncentration.
Det är väl ELISA som används i graviditetstester, hur är dessa kvantitativa?
Inom sjukvården kan det nog vara så.
De graviditetstest som finns i mataffären fungerar även de med antikroppar, och de fungerar så här
