Tvåfaldig seriespädning
Koncentration på stamlösningen är 20 mM. Gör en tvåfaldig seriespädning i fyra rör där första rörets spädning är 1/10 och slutvolymen i varje rör ska vara 1 mL (späd med vatten).
Hur mycket stamlösning ska jag ta till första röret och hur mycket vatten ska jag ha i alla??
Förståt att man använder sig utav formeln c1 x v1=c2 x v2
Får då fram att 20 x v1=10 x 1000 (eftersom 1 mL är 1000 uL och jag måste pipettera med mikropipett senare i uppgiften)
V1 blir då 500 uL. Alltså ska jag ta 500 uL av stamlösningen, eller? Hur mycket vatten ska jag då ha i röret i början?
Vad menas med en tvåfaldig seriespädning? När jag googlade på det begreppet var den enda länken till just den här tråden.
Det innebär i princip en 1:2 spädning. Att varje spädning ska koncentrationen halveras. Så jag förstår att koncentrationerna i rören ska bli 10 mM, 5 mM, 2,5 mM och 1,25 mM eftersom stamlösningena koncentration var 20 mM. Men det är volymerna jag inte förstår mig på.
Rekmackan skrev:Det innebär i princip en 1:2 spädning. Att varje spädning ska koncentrationen halveras. Så jag förstår att koncentrationerna i rören ska bli 10 mM, 5 mM, 2,5 mM och 1,25 mM eftersom stamlösningena koncentration var 20 mM. Men det är volymerna jag inte förstår mig på.
Hur går detta ihop med det du skrev i det första inlägget:
där första rörets spädning är 1/10
???
Här är uppgiften🤷♀️
Obegriplig (för mig, åtminstone)
Jo det är inte direkt en tydlig instruktion, då det blandas mellan 2-faldig spädning och spädning 1/10.
En "2-faldig spädning" är en direktöversättning av engelskans "2 fold dilution", som resulterar i att koncentrationen halveras genom varje spädning. Det motsvarar en spädning av 1:1, d.v.s. en del av lösningen till en del av vatten, motsvarande 1ml+1ml=2ml vid halva koncentrationen.
(1:2 spädning är en annan sak. Det motsvarar, en del lösning till två delar vatten, så 1/3 av koncentrationen, med 3 gånger volymen. Liknande på saftflaskan, där saften spädes 1+7, d.v.s. 1 del saft till 7 delar vatten, och volymen då blir 8 delar).
Instruktionen tolkar jag (delvis med magkänslan) som att stamlösningen späds 1/10, till första röret av de fyra. Från detta rör (1) görs sedan en tvåfaldig spädning till rör (2), sedan samma tvåfaldiga spädning från rör (2), till rör (3), o.s.v.
För att bestämma vilka volymerna skall vara, brukar det vara enklast börja bakifrån, med att ta reda på hur mycket du behöver i rör (4). I ditt fall verkar det vara 1 ml, som behövs till experimentet. Och för att skapa denna lösning behöver du använda halva slutvolymen från rör (3) lösningen, och resten av volymen med vatten i rör (4).
Och för rör (3) behöver du ha minst 1 ml till experimentet, plus 0,5 ml för att tillsätta till rör (4).
Kommer du vidare med rör (2)?
Är inte lösningarna dyra, eller svåra att blanda till, så brukar det vara enklare att "blanda för mycket" av varje lösning istället. Om experimentet behöver t.ex. 1ml av PBS som skall spädas som i din uppgift, kan du lika gärna späda stamlösningen så att du får t.ex. 2 ml i rör (1), då räcker det precis till att späda rör (2), o.s.v.
Men, i och med att alla inte är superexakta på att pipettera, så kan det vara bra att öka volymen ytterligare lite för att på så vis kompensera för pipetteringsfel (eller om något råkar tappa pipettspetsen med rör (4) lösning, som går förlorad - för det blir drygt att börja späda om ingen).
Tack!
Tror du jag har tänkt & räknat rätt om jag gör så här:
Eftersom slutvolymen i alla rör ska vara 1000 ul räknar jag med formeln c1 x v1=c2 x v2 att från rör 3 till 4 måste jag överföra 500 ul vätska. Samma sak från rör 2 till 3 osv. Så om jag från första röret till andra röret ska överföra 500 ul måste jag ha 1500 ul där från första början.
Eftersom spädningen i första röret ska vara 1/10 (1+9) kan jag då ta 150 ul stamlösning + 1350 ul vatten?
Sedan ifrån den överför jag 500 ul till rör nr 2 (där jag pipetterat i 500 ul vatten). Och från rör nr 2 till nr 3 överför jag 500 ul (där jag också har 500 ul vatten redan)
Hoppas du förstår hur jag menar. Är det rätt tänkt?
Ja precis, det resulterar i 1 ml av varje lösning, vilket brukar vara med marginal för respektive mätserie (kanske till och med åtta brunnar, i och med att ni skall använda 96-brunnarsplatta). Så råkar ni ta lite för mycket av t.ex. rör 2, finns det en marginal på 0.2 ml.
