Tips för att förbättra min gelelektrofores labben?
Metoden:
Sätt igång vattenbadet. Förbered proteinprovet enligt nedan medan du väntar på att det kokar upp. Lägg proteinproverna i eppendorfrören och tillsätt 0,5 ml 1× reducerande provbuffert till varje rör. Stäng locken och märk rören på respektive lock. Knäpp kraftigt med fingret på varje rör, så att innehållet blandas. Det som sker nu är att proteiner extraheras ur provet. Sätt rören i flytblocket, och placera alltsammans i det kokande vattenbadet i 3 minuter. Det som händer i det här steget är att alla proteinerna i provet denatureras, vilket gör att man får skarpare band på gelen när man sedan kör den. Tag upp rören ur vattenbadet och låt dem stå i 5 minuter för att fasta partiklar skall sjunka till botten. Eventuellt kan man centrifugera rören i en bords- eller mikrocentrifug. Häll buffert över gelen, så att ytan är 2-3 mm ovanför kanten/gelens yta. Tag försiktigt loss kammen. Tillsätt proven till brunnar. Kör gelen. Avbryt elektroforesen när färgen i provbufferten nått den bortre/nedre änden av gelen. Det kan ta 2 eller fler timmar. Häll av elektroforesbufferten och lägg gelen i destillerat eller avjonat vatten i en timme. Byt vatten minst en gång under denna tiden. Det är viktigt att få bort så mycket som möjligt av bufferten innan man färgar in gelen. Lägg gelen i plastburken och häll så mycket Coomassie brilliant blue infärgningslösning över gelen att den täcks. Låt gelen färgas in 30 minuter över natten. Avfärga gelen i avfärgningslösningen tills proteinbanden framträder så tydligt som möjligt. Det kan ta upp till 4-6 timmar. Byt avfärgningslösning varannan till var tredje timme. Agarosgelen fotograferas.
(Vi undersökte ägg och proteintabletter i provrören)
Min frågeställning:
Vad innebär resultaten på gel 1 och gel 2? Hur kan man skilja mellan äggproteinet och tablettproteinet? Vad är skillnaden mellan gelerna?
Är det bra frågeställningar? Känns inte som om jag kan diskutera något och vet inte heller hur jag ska tolka mina resultat eller hur jag ska använda det i frågeställningen.
Gel 2:
Gel 1:
Typ om jag ska nu besvara mina frågeställningar så blir kort svar på att de som vandrade längre är proteintablettmolekylerna då de är i midnre storlek och därför åkte de snabbare igenom gelet.
Det är typ det, då alla mina frågor ger samma svar..
Någon som skulle kunna hjälpa mig?
Mariam1999 skrev:Någon som skulle kunna hjälpa mig?
Mariam1999, det står FORTFARANDE i Pluggakutens regler att du måste vänta åtminstone 24 timmar innan du bumpar din tråd. /moderator
Vad har hänt med dina bilder? Jag kan inte se dem varken på datorn eller mobilen. Det är ju dem du ska diskutera, så det är svårt att hjälpa dig när inte bilderna syns.
SvanteR skrev:Vad har hänt med dina bilder? Jag kan inte se dem varken på datorn eller mobilen. Det är ju dem du ska diskutera, så det är svårt att hjälpa dig när inte bilderna syns.
gel 1 ^
gel 2 ^
Detta inlämnas kl. 16.59
Tyvärr kan jag nog bara säga att det ser ut som att avfärgningen inte har fungerat. Gelerna är alldeles för blåa för att det ska gå att se någonting på dina bilder. På gel 1 kan man ana att ni har laddat ganska mycket protein, men på gel två är det så mycket bakgrund att man inte ser något. Detta gör det svårt att dra några slutsatser om proverna.
Du har också beskrivit det lite konstigt. Det står "Låt gelen färgas in 30 minuter över natten". Det måste vara antingen 30 minuter eller över natten? Är det SDS-PAGE-geler? Då är 30 minuter lämpligare än över natten. Färgar man in över natten kan man få avfärga väldigt länge.
Dessutom ser det ut som om hela beskrivningen är kopierad från instruktionen ni fick. Du skriver till exempel "Stäng locken och märk rören på respektive lock", men det borde väl vara "Vi stängde locken och märkte rören på respektive lock", så att du berättar hur ni gjorde?
SvanteR skrev:Tyvärr kan jag nog bara säga att det ser ut som att avfärgningen inte har fungerat. Gelerna är alldeles för blåa för att det ska gå att se någonting på dina bilder. På gel 1 kan man ana att ni har laddat ganska mycket protein, men på gel två är det så mycket bakgrund att man inte ser något. Detta gör det svårt att dra några slutsatser om proverna.
Du har också beskrivit det lite konstigt. Det står "Låt gelen färgas in 30 minuter över natten". Det måste vara antingen 30 minuter eller över natten? Är det SDS-PAGE-geler? Då är 30 minuter lämpligare än över natten. Färgar man in över natten kan man få avfärga väldigt länge.
Dessutom ser det ut som om hela beskrivningen är kopierad från instruktionen ni fick. Du skriver till exempel "Stäng locken och märk rören på respektive lock", men det borde väl vara "Vi stängde locken och märkte rören på respektive lock", så att du berättar hur ni gjorde?
Tack ändå, jag tror att jag klarar mig :)
