Spektrofotometri
Hej!
Jag har i uppgift att bestämma koncentration för ett okänt prov. Vid laborationen har vi spädat provet för att få fram två olika lösningar med två olika koncentrationer.
Jag har ritat kalibreringskurva med standard lösningar och fick fram koncentrationerna på de lösningar med okänd koncentration. Min fråga är vad ska jag göra efter för att få fram koncentrationen på det ursprungliga provet?
R. A. skrev:Hej!
Jag har i uppgift att bestämma koncentration för ett okänt prov. Vid laborationen har vi spädat provet för att få fram två olika lösningar med två olika koncentrationer.
Jag har ritat kalibreringskurva med standard lösningar och fick fram koncentrationerna på de lösningar med okänd koncentration. Min fråga är vad ska jag göra efter för att få fram koncentrationen på det ursprungliga provet?
Om du t ex tar 2 ml av provet och späder det till 10 ml så ändras inte substansmängden av det intressanta ämnet. Kommer du vidare?
Visa spoiler
c = n/v, precis som i Ke1.
Jag har tänkt precis så här, men jag har två lösningar av okända provet och fick fram två olika koncentrationer på dem. När jag räknar ut substansmängd, får jag två olika värde!
Hur ska jag använda formen (c = n/v ) för att lösa uppgiften?
Det går inte att svara på med de knapphändiga uppgifter du lämnar.
Jag har spädat det okända provet två gånger
a) 10 mikroliter okänt prov + 90 mikroliter NaCl-lösning + 1 ml reagens
b) 20 mikroliter okänt prov + 80 mikroliter NaCl-lösning + reagens
Jag har redan spädat kända lösningar och fick fram absorbans värde för var och en. Efter det har jag ritat standardkurvan.
Det okända provet (a) har absorbansen 0.252 => det har koncentration 7.9 mikrogram/ml
Det okända provet (b) har absorbansen 0.320 => det har koncentration 10.2 mikrogram/ml
Hur kommer jag vidare för att få fram koncentrationen av det ursprungliga okända provet?
Lägg upp en bild av standardkurvan och de båda proven!
R. A. skrev:
Hur fick du fram den räta linjen? Med ögonmått, eller har du räknat på den?
Jag har skrivit värdena i miniräknare och fick grafen på miniräknare, men denna är en skiss. Koncentrations värde är noggranna (av miniräknare).
Har du använt värdena från räknaren för att räkna ut var du skulle rita linjen? Vad har linjen för ekvation?
Ja,
Ekvationen är y = 0.0299 x +0.0163
Det stämmer inte med den linjen du har ritat - linjen skall gå genom punkten (10;0,1929) och det gör den inte. När inte linjen stämmer är det självklart att du inte får ut rätt värden. Fast det ser ut om om inte den linjen heller ser särskilt vettig ut.
Vilka koordinater har du fått för din kalibreringskurva? Vad hade du för standardlösningar?
Absorbansvärde koncentration (mikrogram/ml)
Blank 0 0
Lösning 1: 0.086 2.27
Lösning 2: 0.176 4.55
Lösning 3: 0.232 6.82
Lösning 4: 0.267 9.1
När jag har beräknat koncentrationen, har jag använt denna formel:
C Lösning 1 = (C ÄMNET. V ÄMNET)÷ Vtotal
är den rätt?
Här har jag ritat upp dina punkter:
Jag multiplicerade ditt k-värde med 100, innan dess var linjen praktiskt taget vågrät. Jag har inte ändrat m-värdet.Denna linje är svart. Den blåa sneda linjen är en proportionalitet som jag har tagit fram med ögonmått.
De vågräta röda och blå linjerna är de värden som du har angivit för de båda okända värdena. Det ser väldigt annorlunda ut än din bild.
Jag har ritat grafen med tanke på att koncentration ska vara x-axeln och absorbansen på y-axel.
Jag fortfarande vet inte hur ska jag komma vidare!
Ah, du har skrivit x-och y-koordinaterna baklänges! Då får jag göra en ny graf. Då blir det så här istället (mycket mer lik din graf):
Jag har fortfarande ingen aning om orsaken till att inte den ena av dina okända prov inte har dubbelt så hög absorbans som den andra, som den borde.
Om den ena har dubbelt så hög absorbans som den andra, så kan jag använda formeln C okänt= (C.V) /V och få fram koncentration på det ursprungliga okända provet. Är det rätt tänkt?
Eftersom du hade spätt det ena provet 5 ggr och det andra med en faktor 10 så borde det första provet ha haft dubbelt så hög absorbans som det andra.
Tack för hjälpen!
Har du fått ordning på problemet?
Ja, typ...
Kan du förklara vad menar du med 5 ggr och faktor 10.
Jag tänker om jag förstår det här, kan jag förstår sammanhanget.
Jag tror också att jag har gjort nåt fel vid laborationen.
Kan du förklara vad menar du med 5 ggr och faktor 10.
Jag tänkte på det du har skrivit här:
Jag har spädat det okända provet två gånger
a) 10 mikroliter okänt prov + 90 mikroliter NaCl-lösning + 1 ml reagens
b) 20 mikroliter okänt prov + 80 mikroliter NaCl-lösning + reagens
Om jag tolkar det rätt har du gjort två spädningar, en där du hade 1 del prov och 9 delar NaCl-lösning, och en där du har blandat 1 del prov med 4 delar NaCl.
Vad är det för reagens du nämner? 1 ml reagens låter väldigt mycket jämfört med 0,1 ml prov + NaCl.
Det är Bradford reagens.
Ja
