Restriktionsenzym och plasmider
Jag har snart prov och har nu fastnat på följande instuderingsfråga:
"Varför måste man klippa upp en plasmid med samma restriktionsenzym som man använde för att klippa ut det DNA som man vill föra in i en bakterie?"
Kan det möjligtvis vara så att restriktionsenzymet vet om i vilken sekvens den har klippt i DNA och då vet var den kommer att passa in i plasmiden? Eller har jag fel?
Finns det någon där ute som kan vara snäll och hjälpa mig?
Precis. Om du klipper ut en bit DNA som du sen vill stoppa in i plasmiden (A i figuren) med restriktionsenzym som ger klibbiga överhäng (sticky ends på engelska) kommer dessa klibbiga överhäng att passa ihop motsvarande klibbiga överhäng i din klyvda plasmid (längst ner i B delen av figuren) - men bara om du använder samma restriktionsenzym.
Oftast används två olika restriktionsenzym, så du får ett unikt klibbigt överhäng i ena änden av din DNA bit och ett annat i den andra änden, och motsvarande i din plasmid - då kan din DNA bit bara passa in på ett sätt (som i figuren nedan där HindIII och KpnI används).
Tack nu förstår jag!
