Proteinanalys: maskinrening med IgG antikropp droppkolonn?
Hej, i vårt labbkompendium står:
Till labbet har vi skaffat in de reningsmatriser och kolonner som vi tror att ni kommer vilja
använda. Det som finns att tillgå är:
- Ni Sepharose 6 Fast Flow-matris att packa i kolonn själv. Binder His-taggar.
- HisTrap Ni Sepharose – färdigpackade ÄKTA-kolonner som binder His-taggar.
- IgG Sepharose – matris till affinitetskromatografi. Kan packas i droppkolonner.
- Superdex 75 - en matris för storleksseparation. Kan packas i stora XK-kolonner till ÄKTAsystemen.
- Sephadex G-25 matris, färdigpackat i PD10-kolonner, för buffertbyte och avsaltning.
- MabSelect sepharose - Kan packas i droppkolonner, binder till flera olika
immunoglobulintyper med olika styrka.
Vi vill använda IgG antikroppar som ligand i affinitetskromatografi, men vet inte om deras skrivsätt implicerar att det ej går att utföra den i en ÄKTA renare... På andra, tex Superdex 75 uttryckligen att det ska användas med ÄKTA.
Jag är lite osäker på vad de menar med droppkolonner, men jag gissar på en enklare "gravity flow"-kolonn som ni får packa själva och där ni får köra alla steg manuellt. Så nej, den är nog inte kompatibel med ÄKTA-systemet.
Ja, det är gravity flow kolonner.
Okej! Tack för bekräftelsen
Men vad betyder det att den inte är kompatibel? Det är väl bara att ladda på matrisen och trycka in kolonnen i ÄKTA?
Jag har inte kört ÄKTA själv men är det en väldigt enkel kolonn kanske den inte ens har en slang upptill utan du sätter till prov och buffertar med pipett, och hur ska du koppla in den då?
Ja just det, det låter rimligt, glömde det. Jag har bara provat en ÄKTA en gång, och då bara med etanol genom alla rören.
Gravity flow kolonner krävs för vissa typer av kolonnmatrix (det separationsmaterial som kolonnen fylls med) då LC systemen (t.ex. ÄKTA) är trycksatta, och många kolonnmatrix inte tål att trycksättas, de krossas helt enkelt. LC systemen har även ett inneboende systemtryck ("baktryck") som uppkommer av motstånd i systemets delar (typ 0.2 MPa för ett ÄKTA system), och systemtrycket och trycket som vätska utövar belastar kolonnens matrix.
Det går så klart att packa egna kolonner med valfritt kolonnmatrix till LC system (förutsatt att matrixet klarar trycket) i kolonner anpassade för systemet, men gravity flow är ett bra val för mindre kolonnvolymer och vid enklare elueringar, som vid affinitietskromatografi; ladda på provet, tvätta, eluera.
