Pcr test negativt och positivt kontroller

Vad hittade du på nätet?

Jag hittade lite varierande grejer, jag förstod att negativ kontroll är typ ren från DNA och man använder den för att jämföra med den positiva, alltså man vet att man inte kommer få något resultat från den negativa, utan typ om något vissas på den positiva typ spår av något (som inte vissas i det negativa) så kan man säga att den DNA i den positiva kontrollen har någon typ av virus eller så. Stämmer detta? det är typ det jag har förstått när jag läste. Är det allt? 

Generellt för PCR förväntas att ett resultat/produkt kan fås med templatet och en korrekt reaktionsblandning (korrekta primrar, polymeras, dNTPs, buffer m.m.). Och för att kunna analyser om en specifik produkt bildats från templatet, används positiv/negativ kontroll. Fås ingen produkt från provet (t.ex. inga band på en agarosgel) kan det bli svårt att lista ut vilken del som inte fungerat vid PCR. Kontrollerna bidrar med mer information, vilken kan användas lista ut problem och/eller verifiera att korrekt produkt bildats från templatet.

Jag fattar den där, och fattar det hela om elektroforesen (kan ha stavat det fel) men jag ville veta om jag hade förstått negativt och positivt kontroll rätt?

Det du skrev är aningen otydligt, så utan att du formulerar om det, går det inte riktigt att svara ja eller nej på din fråga. Det skulle t.ex. inte varit ett tillfredsställande formulerat svar på en tenta.

Negativ och positiv kontroll är två olika kontroller som man förbereder med exakt samma reagenser (primers, buffert, Mgcl2 etc) förutom att man endast har DNA template i den positiva kontrollen. Dessa kontroller används under PCR för att jämföra de med en DNA stege och veta om patienterna vi undersöker är infekterade av något slags virus. Anledningen till att vi inte har DNA template i den negativa kontrollen är för att jämföra den med den positiva kontrollen, vi vet redan att vi kommer inte får något resultat ur den negativa kontrollen, men om något tecken eller spår i den  positiva kontrollen skiljer sig från den negativa kontrollen, då kan vi vara säkra på att det spåret i den positiva kontrollen är pga virus . 

så? Är det bättre nu? 

Krul tepes skrev:

Negativ och positiv kontroll är två olika kontroller som man förbereder med exakt samma reagenser (primers, buffert, Mgcl2 etc) förutom att man endast har DNA template i den positiva kontrollen. Dessa kontroller används under PCR för att jämföra de med en DNA stege och veta om patienterna vi undersöker är infekterade av något slags virus. Anledningen till att vi inte har DNA template i den negativa kontrollen är för att jämföra den med den positiva kontrollen, vi vet redan att vi kommer inte får något resultat ur den negativa kontrollen,

Så långt stämmer det

men om något tecken eller spår i den  positiva kontrollen skiljer sig från den negativa kontrollen, då kan vi vara säkra på att det spåret i den positiva kontrollen är pga virus . 

Nej detta stämmer inte. Du verka ha blandat ihop det lite. Det du beskriver ovan är skillnaden mellan en negativ kontroll (ingen PRC-produkt förväntas), och ett prov. I provet kan det finnas "virus", men det behöver inte finnas något virus - och om det finns PCR-templat (t.ex. virus) och PCR-reaktionen fungerat korrekt kommer produkt (som du kallade "spår) att bildas.

Men om ingen produkt bildas i något av proven, hur kan du då veta att det beror på att templat saknades om du inte verifierar att PRC-reaktionen fungerar?

Varierar man om det fungerar eller inte med hjälp av negativa kontrollen och DNA stege (DNA Ladder) typ om den rena negativa kontrollen följer DNA stege så fungerar det?.. är osäker..

Nej. PCR-reaktionen du funderar över verkar göras för att se om (en del av) ett virus arvsmassa finns i ett prov. Och för att kontrollera att PCR-reaktionen fungerar som den skall används kontrollerna - men alla dessa har egna individuella rör. Och efter reaktionen jämförs om/hur väl de individuella rörens PRC-reaktionerna gått - och för att göra detta jämförs reaktionerna med stegen. Detta borde delvis vara bekant från kursbokens beskrivning av PCR (annars finns det massvis att läsa om hur PCR görs på nätet).

Det blir lite svårt att diskutera kontrollerna när begreppen och/eller koncepten inte är bekanta.

Asså, vår lärare förklarade inte så mycket, nu tittar jag på min labb igen, vi har gjort två negativa kontroller och två andra med patient DNA (som skulle ha virus. Två olika patienter) 

asså jag läser om detta och försöker förstå det på riktigt, och om jag har nu förstått rätt så menar du att man först jämför Pcr reaktioneerna med stegen, och då menar du  alla reaktioner eller bara de positiva kontrollen? Jag har förstått att det är alla. Och när man verifierar att det har gått bra, jämför man det negativa med det positiva? Och tolkar resultatet? 

Krul tepes skrev:

Asså, vår lärare förklarade inte så mycket, nu tittar jag på min labb igen, vi har gjort två negativa kontroller och två andra med patient DNA (som skulle ha virus. Två olika patienter) 

Men då har du ingen positiv kontroll, eller?

Asså jag själv vet inte, nu tänker jag på det, vår lärare har inte ens förklarat! Men tror att vi vår positiva kontrollen av henne eller nåt. Men kan inte patient rören fungera som positiva kontroll? 

Hej, jag vet nu att vi får en positiv kontroll på en av virusen av vår lärare samt negativa controller