Kinetik
Hej!
Penicillin hydrolyseras av penicillinas (β-laktamas) som finns i vissa antibiotikresistenta
bakterier. Molmassa av detta enzym i Staphylococcus aureus är 29,6 kDa. Antal nanomol av
penicillin som hydrolyseras under 1 minut i 10-ml lösning som innehåller 10-9 g penicillinas
var uppmätt som funktion av penicillin koncentration (Tabell 1).
Tabell 1.
Penicillin koncentration,
µM
Substansmängd av
hydrolyserat penicillin
(nanomol)
1 0,11
3 0,25
5 0,34
10 0,45
30 0,58
50 0,61
a) Plotta V0=F([S]) och 1/V0=F(1/[S]). Följer penicillinas Michaelis-Menten kinetik? Om
ja, räkna ut Km.
b) Vilket värde har Vmax?
c) Vilket turnover (Kcat) har penicillinas under dessa experimentella förhållanden? Anta
att det finns ett aktivt säte per en enzymmolekyl.
I facit står det:
1. a) Km = 5,2 uM
b) Vmax = 68,5 nM/min
c) Kcat = 338 s-1
Jag vet inte alls hur jag ska tänka, skulle vara tacksam om jag fick hjälp.
Börja med att leta upp formeln för Michaelis-Menten-kinetik och skriv upp den här.
Michaelis-Menten formeln är:
Det enklaste är nog att göra en Lineweaver-Burk-plot. Då räknar du ut 1/v0 och använder det som y-värden, samtidigt som x-värdena ges av 1/[S]. Om reaktionen följer den här typen av kinetik så ska nu alla punkter ligga längs en rät linje. Dra en trendlinje och läs av dess lutning samt skärning med y-axeln. Lutningen motsvarar kvoten Km/v(max) medan skärningen motsvarar 1/v(max). Du får bäst precision genom att göra detta i Excel, men det borde funka att göra för hand.
Okej, tack. Men hur ska jag omvandla enheterna? Substansmängden är i nanomol och koncentaration M. Ska de båda inte ha samma enhet?
Jag vet att jag kan omvandla nano till mikro genom att dela på 1000. Men då blir det mikroM och mikromol.
Jag skulle ha gjort om allt till mol och mol/dm3. 1 mikromolar är 10^-6 mol/dm3 och 1 nanomol är 10^-9 mol.
jag undrar varför vi behövs Substansmängd av
hydrolyserat penicillin
(nanomol)
isrdah201 skrev:jag undrar varför vi behövs Substansmängd av
hydrolyserat penicillin
(nanomol)
Det hydrolyserade penicillinet är produkten i denna enzymkatalyserade reaktion. För att se enzymets aktivitet analyseras hur mycket produkt som bildats (det går även följa aktiviteten genom att t.ex. följa förbrukningen av substratet också eller en kofaktor).
