Kalibreringskurva
1. Man skulle tillverka standardkrav med 5 koncentrationer inklusive blank . Standard är BSA med 2 mg/ml. Man skulle börja med 1,5 mg/ml och späda ner.
2. Sedan skulle man blanda 1 ml reagens med 25 mikroliter av respektive standard och patientprov.
Jag har tänkt såhär:
1,5 mg/ml, 0,75 mg/ml, 0,375 mg/ml, 0,1875 mg/ml
V1*C1=V2*C2 = V1*1,5 mg/ml = 100 mikroliter * 0,75 mg/ml => V1= 50 mikroliter standard och
100 -50 = 50 mikroliter spädningsmedium ( PBS) . Tänker jag rätt när det gäller volym 2 alltså att jag ska tillverka TOT 100 mikroliter i och med att jag ska bara ta 25 mikroliter av respektive standard eller är det för mycket för lite och om mina koncentrationer är lämpliga.
För blank ska jag blanda 1ml reagens + 25 mikroliter PBS tänker jag rätt här med?
Tack i förhand!
Nja, inte riktigt. Hur mycket vätska behöver du för varje prov till standardkurvan, räcker det med 0,1 ml?
Och om du tittar på koncentrationen i 1), vilken är den högsta koncentrationen du skall använda, samt hur blandar du till den?
Jag ska göra spädningsserie från konc 1,5 mg/ml till konc 0,75mg/ml osv . Jag ska tillverka fyra provrör med dessa koncentrationen. Den första röret ska vara 100 ul (50 ul standard + 50 ul PBS) och från första röret ska jag ta 50 ul till andra osv . Den fjärde ska innehålla 100 ul. Från varje provrör (som är 4) ska jag ta 25 ul och överföra till reagens som är också fyra provrör med 1ml då blir det tot i varje provrör 1025ul.
Man skulle börja med koncentration 1,5 mg/ml och jag valde att späda 1:2.
Men , vilken koncentration får du i ditt första rör om du använder dina volymer och stocklösningens koncentration?
Den ursprungliga är 2 mg/ml BSA men enligt instruktioner skulle jag börja med 1,5 mg/ml och späda ner?
Koncentration första röret är 1,5 mg/ml .
Min andra tråd var gällande des.vatten vs PBS, gör det skillnad om jag blandar med PBS ist för vatten och tvärtom för det står inte i utförande med vad jag ska späda.
Lär mig skrev:Den ursprungliga är 2 mg/ml BSA men enligt instruktioner skulle jag börja med 1,5 mg/ml och späda ner?
Koncentration första röret är 1,5 mg/ml .
I uppgiften står det att du skall tillverka en spädningsserie. Koncentrationen i stocklösningen (d.v.s. den lösning som är förberedd, och som du kommer använda till att göra spädningar med) är 2mg/ml.
I din instruktion skall spädningsserien starta med (d.v.s. den högsta koncentration skall vara) 1,5mg/ml. Det står ingenstans att du kommer att ha en lösning med koncentrationen av 1,5mg/ml när du börjar.
Det är istället din spädningsserie som skall ha 1,5mg/ml som högsta koncentration.
Så du menar att C1= 2 mg/ml och C2 1,5 mg/ml? då V1= 100*1,5/2 = 75 ul ska jag ta från stocklösning men hur ska jag går vidare om jag vill späda 1/2 ?
första provrör = 75 ul stock+ 25 ul PBS
Andra provrör = 50ul från första provrör och 50 ul PBS
tredje = 50 ul från andra provrör och 50 ul PBS
fjärde = 50 ul från tredje provrör och 50 ul PBS
men normalvärde för patientprov är långt från mina koncentrationer
Lär mig skrev:första provrör = 75 ul stock+ 25 ul PBS
Andra provrör = 50ul från första provrör och 50 ul PBS
tredje = 50 ul från andra provrör och 50 ul PBS
fjärde = 50 ul från tredje provrör och 50 ul PBS
Ja, precis då får du en spädningsserie som motsvarar den i din uppgift.
men normalvärde för patientprov är långt från mina koncentrationer
Det går inte riktigt att kommentera, innan du visar hur du räknat.
Tack så mycket för hjälpen
För all del!
Om du inte fått ordning på patientprovets koncentration ännu, kanske det kan vara en bra idé att kolla enheterna, samt spädningarna, som nog skiljer sig åt.
Vad menar du med att kolla spädningarna ? att mina spädningar som jag redovisade ovan kan vara fel? för jag ska göra kalibreringskurvan med x-axel (konc) och y-axel (absorbans) och mha absorbans på patientprov hitta koncentrationen. Jag tänker i och med att mina koncentrationsintervall kommer vara 1,5-0,1875 mg/ml så kanske kommer bara normalvärden i urin som är <0,03 mg/ml att kunna hittas i närheten av intervallet eller ?
Jag har inte gjort labben än.
Lär mig skrev:Vad menar du med att kolla spädningarna ? att mina spädningar som jag redovisade ovan kan vara fel? för jag ska göra kalibreringskurvan med x-axel (konc) och y-axel (absorbans) och mha absorbans på patientprov hitta koncentrationen. Jag tänker i och med att mina koncentrationsintervall kommer vara 1,5-0,1875 mg/ml så kanske kommer bara normalvärden i urin som är <0,03 mg/ml att kunna hittas i närheten av intervallet eller ?
Jag har inte gjort labben än.
Min poäng vara att, patientprovets koncentration är okänd, och du kommer späda detta prov med reagens etcetera. Och du har även spätt dina prover till kalibreringen. Och eftersom du sannolikt inte kommer späda på precis samma vis behöver du kompensera för spädningarna, när du väl har samlat mätdata.
Jag ska överföra 0,025 ml av patientprov till 1ml reagens och i det fallet späder jag patientprov 40 ggr så patientprov koncentrationen som jag kommer hitta i kurvan ska multipliceras med 40?
Tänker jag rätt?
Nja, nästan. Du späder 1+40, men patientprovet utgör inte en 40-del av slutvolymen.
Testa att räkna själv, t.ex. med C1V1=C2V2.
