Jonbyteskromatografi
Du ändrar pH-värdet på urinprovet så det blir neutralt. Albumin har en isoelektrisk punkt på 4,6. Albuminet blir därför negativtladdat.
Med hjälp av jonbyteskromatografi, en kolonn packad med positivkolonnmassa, får du albuminet att stanna i kolonnen medan övriga proteiner åker igenom.
Hur gör du för att få ut albuminet från kolonnen?
Hur ska man göra här? Skulle man kunna hälla in en vätska, vars innehåll är positiva joner i hopp om att Albuminet binder sig till de positiva jonerna i vätskan?
Det är ett alternativ, men du kan ju inte enbart ha en lösning med positiva joner utan det måste finns lika hög negativ som positiv laddning i lösningen. Däremot kan du använda en saltlösning med högre salthat vilket då gör att koncentrationen av negativa laddningar också är högre i lösningen. Det kommer göra att de binds till kolonnmassan vilket innebär att albuminet ”lossnar”.
Ett alternativ är att använda en lösning med lågt pH. Vad händer om du försöker få ut (eluera) proteinet med en lösning som har ett pH under aminosyrans isoelektriska punkt?
Den blir positivt laddad och därför släpper den från den stationära fasen?
