0 svar
419 visningar
Roma 70
Postad: 27 jul 2019 18:50

Jonbyteskromatografi

Jag ska rena fram mitt protein som är enzymet laktatdehydrogenas med hjälp av jonbyteskromatografi. Proteinet har pI = 6.51 

Proteiner är negativt laddat enligt det här utdraget från programmet ProtParam:

Total number of negatively charged residues (Asp + Glu): 38
Total number of positively charged residues (Arg + Lys): 36

Då väljer man en anjobytare.

det är inga problem att lösa den första frågan men så kom den här frågan upp och då blev jag fundersam: 

Hur ska du göra din buffert? Du har tillgång till Tris, Natriumvätekarbonat och natriumacetat. Du vet att pKa för HAc (ättiksyra) är 4,75, för Tris-H+ är pKa=8,07 och för H2CO3 är pKa,1 = 6,35 och pKa,2 = 10,33. Du har också tillgång till HCl och NaOH för titrering. En översiktlig beskrivning av vad som vägs in och vad som används för titrering räcker

Jag vet att man ska välja pka som är ungefär lika med pH för att få en bra buffertkapacitet men samtidigt ska man aldrig välja en jonbytare vid pI då proteinet aldrig kommer binda. SÅ jag vet inte vilket pka jag ska välja 

Någon som har koll på sånt och kan hjälpa mig?

Svara
Close