Isoelektisk fokusering
I min lärobok står det att proteiner har en negativ laddning vid det pH som råder i gelen (som används vid isoelektrisk fokusering) från början och att de av den anledningen börjar vandra mot pluspolen. Sedan byggs det upp en pH-gradient på grund av amfolyterna. Alla proteiner har väl olika IP så hur kan alla proteiner vara negativt laddade i gelen från början?
Vilket pH är det i början av gelen?
Och vilket pH är det i slutet av gelen?
mag1 skrev:Vilket pH är det i början av gelen?
Och vilket pH är det i slutet av gelen?
Hur menar du? Alltså, det är väl amfolyter som bygger upp själva gradienten, så den kan väl skilja sig ganska mycket? Men innan gradienten byggts upp står det att alla proteiner har en negativ laddning vid det pH som är från början, har gelen då en bestämd pH vid vilket alla proteiner är negativt laddade?
Jag vet ju inte vad det står i din lärobok, men jag misstänker att du har missförstått när du skriver "Sedan byggs det upp en pH-gradient på grund av amfolyterna". I gelen finns en pH-gradient från början, eftersom man har immobiliserat (dvs bundit) olika buffertsammansättningar på olika ställen i gelen.
I den änden där det är som mest basiskt kommer alla proteiner att vara negativt laddade. I andra änden, där det är surast kommer alla att vara positivt laddade.
