Graf över toppar som en funktion av substratkoncentration

Var detta en laboration där ni lät ett enzym reagera med substratet av olika koncentrationer och så mätte ni absorbansen på provet snabbt efteråt reaktionen startat?

Ja det stämmer.

Då är det en graf du kommer få där x-axeln är startkoncentrationen på substratet och då få punkter med ett y-värde som är absorbansen, dvs. koncentrationen av produkten, efter en viss tid reaktionen har gått. Så ser man att koncentrationerna av substratet påverkar hur snabbt du kommer att få en viss koncentration på din produkt. Efter att du troligen har ökat substrat koncentrationerna i ett antal olika försök så kommer du se att enzymet når sin maximala katalyserings hastighet vid någon speciell startkoncentration substrat då alla enzym är "upptagna/mättade", detta är då en förklaring till peak heights där enzymet katalyserar reaktionen av substratet till produkten så snabbt den bara kan. Sedan spelar det ingen roll hur mycket koncentration du än matar i provet så kommer du aldrig komma över den hastighet som enzymet blir mättat av för det finns helt enkelt inte något enzym kvar som kan reagera med substratet utan de för gott vänta på att ett påbörjande substrat håller på att reagera med enzymet.  

En annan variant av att mäta enzymet reaktionshastighet är att kika efter substratets absorbans efter att du startat reaktionen så ser du att absorbansen(koncentrationen) har minskat i jämfört med start, dvs ju större skillnad desto snabbare har reaktionen gått p.g.a. fler substratmolekyler i provet som enzymet kunde reagera med.

Okej, men du säger startkoncentrationen av substratet på x-axeln. Är det bara startkoncentrationen som ska vara på x-axeln? Tänker att jag tar absorbansen (koncentrationen av produkten) på y-axeln som du sa och sen alla tillsatta koncentrationer av  substratet på x-axeln, var det så du menade?

Eller jaha, jag förstår vad du menar. Vi använde en perilastisk pump (?) och körde igenom substraten på det viset och då menar du att startkoncentrationen är varje gång vi körde igenom och trappade upp substratkoncentrationen? Däremellan körde vi med en buffert. Så grafen kommer att se ut sådär: Abs (y) och Koncentration substrat (x). Men då kan jag ju inte plotta alla olika koncentrationerna i en och samma graf för koncentrationen substrat är väl noll mellan startkoncentrationerna då vi körde bufferten?

När jag gjorde en liknande labb så körde vi med en spektrofotometer som vi stoppade in 13 olika prov, en i taget. Proven innehöll substratet, enzymet och bufferten. Bufferten hade vi för att b.la. fylla upp till samma volym i alla våra små olika mikroprov. 

För varje prov så: När allt blandats i samma ordning med ämnena så startade reaktion direkt och vi stoppade in direkt i spf.metern och tog absorbansen vid start, vi väntade 60 sekunder och tog absorbansen igen på samma prov. Vi hade order att skriva grafen som: x-axeln var mängden enzym i milligram. y-axeln var reaktionshastigheten uttryckt i (µmol/min) som beskriver hur fort koncentrationen av substratet förändrades i just dem 2 punkter vi tog för samma prov. Enligt formeln för att räkna ut absorbansen så bevisar det hur vi kunde skriva reaktionshastigheten på det viset: $$\begin{gathered} A=\epsilon \times l\times c \leftrightarrow \frac{∆A}{∆t}=\frac{∆c}{∆t}\times \epsilon \times l \\ A= absorbansen. \\ c=koncentrationen av det absorberande ämnet. \\ \epsilon =extinktionskoefficienten (6,22\times {10}^3 M^{-1}c{m}^{-1}). \\ l= kyvettens längd. \end{gathered}$$

Så det går att koncentration substrat eller enzym på x-axeln och koncentrationen (absorbansen) på y-axeln i vilken enhet du själv vill ha som reaktionshastighet av produkten eller hur mycket substrat som är kvar t.ex.

Ni verkar ha kört enbart bufferten i mellan eller? isåfall ska du ju inte ha med den eftersom det bara är en kalibrering för apparaten. 

Okej jag förstår. Tack för hjälpen! Men jag vet väl inte hur mycket enzym som finns? Vi immobiliserade enzymet på ett membran där sen substratet fick rinna igenom, jag vet vad substratkoncentrationen är i och med att vi körde ett cirkulärt system, och produktkoncentrationen kan jag ju få ut eftersom vi mätte absorbansen för produkten sen i spektrofotometer.

Ja de har du rätt i, då är det nog menat att ni ska mäta substratet istället för enzymet!

Ja okej, vilken typ av graf gör jag då?

tangotanga skrev:

Ja okej, vilken typ av graf gör jag då?

 Jag svarade i den andra tråden du la upp om enzymaktivitet, hur en graf kan se ut för dig.