Framtagning av mCherry-fuserad insulinantikropp
Hej, frågan lyder:
Ni ska ta fram ett fusionsprotein för detektion av insulin i serum genom genetisk fusion av en insulinbindande antikropp och ett fluorescent protein, mCherry. Vilken strategi skulle ni använda för att genera den insulinspecifika antikroppen och varför?
Men jag förstår inte frågan. "vilken strategi för att generera...", ska jag ge förslag om tex värdorganism och kloningsmetod? Det hör inte till kursen jag läser nu...
Den genetiska fusionen görs med fördel med en lång linker för att undvika krångel med paratopen eller folding, det kan jag i alla fall säga.
Okej men vi kan inte ge någon återkoppling på det då vi inte vet vilken kurs det rör sig om?
Men jag tolkar frågan som du, att strategin beskriver kloning, organism för rekombinant uttryck etcetera.
Men det beror så klart på kursens förväntningar, och vilka begränsningar som finns.
En strategi kan t.ex. vara att låta ett företag göra allt detta efter din design. Om du designar ett konstrukt med en känd sekvens för en anti-insulin antikropp och lägger till mCherry, och låter ett företag syntetisera detta åt dig kan de leverera en färdig expressionsvektor. Utifrån den kan du låta bolaget framställa den färdiga fusionen, eller göra detta själv i din valda expressions-värd.
Som frågan är ställd är den ganska öppen för vilken strategi du väljer.
Är planen (eller ämnet för tillfället) ELISA så är det nog bra om du även tänker på hur du vill detektera det hela. Din antikropp-fusion kan du inte immobilisera i plattan, och insulinmolekylen är ganska liten. Här skulle kanske sandwich ELISA funka, med immobilisering av en Ab mot en paratop, och detektion med antikropp-mCherry mot en annan paratop på insulinet. Insulinet finns i serum, och det kanske går att binda in det direkt på plattan.
Våran kurs heter "analys av biomolekyler", så analysmetoder. MS, SPR, ELISA, CD, FC, röntgen/NMR och sånt.
Ditt sista är nog det som förväntas och jag tänkte också i den banan, men då är frågan konstigt ställd...
