Cellberäkning
Givet fråga: För att kunna genomföra en cell passerad analys skall du göra i ordning en lösning med odlade celler av en viss koncentration. För att genomföra försöket behöver du totalt 20 ml celler med koncentrationen 25 000 celler/ml. De celler då har till ditt förfogande Finns i en flaska som innehåller 5 ml odlingsmedium med totalt 3 miljoner celler.Beskriv hur du kan gå tillväga för att göra i ordning de celler du behöver med rätt koncentration. Till din hjälp har du medium för cellodling, färglösning för att kunna detektera levande celler, mikroskop, provrör, pipetter för mätning av olika volymer och sk. räknekammare.
Den fråga finns redan i sidan! Men har liknande så försöker jag lösa uppgiften. Eftersom koncentrationen och volymen är given, tänkte att jag kan lösa uppgiften. Men sen följer frågan " du har till hjälp miskrokopp, färglösning och räknekammare"! Varför behöver jag de?
Syftet med uppgiften är att få studenterna att "inte bara räkna ut en volym som på matten", utan även att tänka igenom hela förfarandet - motsvarande att du planerar inför laboration/experiment.
Hur skall du späda? Vilka delar av utrustningen skulle du använda o.s.v.
Det går t.ex. inte att mäta upp 0,833 ml av en cellodling, och med (god) precision lyckas överföra precis rätt antal celler rent praktiskt. Risken för att det blir ett pipetterings-/mätfel är lite för stor. Ofta används istället en spädningsserie, vilket även ger en möjlighet att kontrollräkna antalet celler i slutet.
Matematikuppgifter kan ge ett exakt svar, men ett exakt svar är inte alltid användbart i praktiken.
Försökte förklara för mig på många sätt genom att beräkna hur många fynd i A -ruta, spädning faktorn osv
Försökte förklara för mig på många sätt genom att beräkna spädning faktorn för färglösning men också kollat hur koncentration skulle ge spädning faktorn som kan hjälpa mig vidare. Men svaret för skiljer 1/2 från den första beräknat i 5 ml lösningen! Hjälp ☺️ hur skulle jag kunna börja?
Din första uträkning av spädningen stämmer, men du kan inte späda detta direkt, utan behöver späda i omgångar för att minimera riskera att spädningens resultat (d.v.s. cellernas slutgiltiga koncentration) inte blir fel.
Ofta sköts spädningen i steg som är bekväma att använda, t.ex. 1:9 spädningar, så att koncentrationen minskar med en faktor 10. Du kan inte göra detta hela vägen utan behöver anpassa spädningsfaktor i en eller flera av spädningsstegen.
När du späder i flera steg är det dessutom enkelt att späda så att du får lite större volym av vätskan, och du kan då använda denna extra volym till t.ex. att räkna cellernas koncentration efter just den spädningen.
Det här är min slutliga slutsats och allt vad jag kunde kommit fram. Jag tänkte; spädning 1 ( 5 ml stamlösningen+ 15 odlingsmedium). Spädning 2 ( 10 stamlösning + 10 odlingsmedium) osv. Men osäker om det stämmer!
Kollade inte riktigt igenom alla dina beräkningar tidigare, men det är lite knas.
Räknandet med spädningsfaktor har kanske strulat till det lite för dig och siffrorna du använt stämmer inte riktigt. Du har dividerat med slutkoncentrationen, men C-före stämmer inte, det står 3 miljoner celler/ml i uppgiften.
Spädningsfaktorn för cellerna blir istället Cinnan/Cefter= 3 miljoner celler/ml delat med 0,5 miljoner celler, vilket blir 6, så du behöver späda ut cellerna sex gånger.
Enklare är kanske att räkna med antalet celler och volymerna direkt (som ni gjorde i Ke1/2, med n=C x V). Där mängden celler som behövs fås genom = C x V = 250000 celler/ml * 20 ml = 500000.
Och den cellösningen du skall späda ifrån har koncentrationen 3 miljoner celler / ml.
Tusen tack för ur time🤗
Visst är det mycket enklare med den kända konc-formel. Men när jag försöker får jag fram volymen som 0.83333ml som sedan tidigare kommenterad att det kan går fel med!
Men vart kom C-efter 0,5 celler ifrån? Men om koncentrationen delas med annan koncentration ska de inte ha samma enhet eller!
"Spädningsfaktorn för cellerna blir istället Cinnan/Cefter= 3 miljoner celler/ml delat med 0,5 miljoner celler, vilket blir 6, så du behöver späda ut cellerna sex gånger."
Gick lite snabbt där.koncentrationen efter är så klart 25000 celler per ml.
(0,5 miljoner är det totala antalet celler som behövs, 25000 celler/ ml x 20 ml).
FÖRLÅT
Visst är det mycket enklare med den kända konc-formel. Men när jag försöker får jag fram volymen som 0.83333ml som sedan tidigare kommenterad att det kan går fel med! Vad gör jag för fel där?
0.833 låter skumt för 0.833ml x 3 miljoner celler/ml = 2,5 miljoner celler. Men delar du det med 20 ml blir koncentrationen av celler ca 125000 celler /ml. Och det är för mycket.
Så här räknade jag:
Experimentet kräver 20 ml med 25000 celler/ml, d.v.s. totalt behövs 0,5 miljoner celler
Cellösningen är på 3 miljoner celler /ml. Den är m.a.o. 3x106/2,5x104 = 120 gånger mer koncentrerad än experiments lösning.
5x105 celler behöver du för experimentet, och du behöver får fram volymen av cellösningen, t.ex. genom c1 x v1 = c2 x v2, som stuvas om till v1 = (c2 x v2) / c1
Det blir v1 = (2x105 x 20)/3x106 = 0,167 ml. Men denna volym är knepig att pipettera, så om du späder i flera steg blir det mindre fel.
Du kan t.ex. ta 1 ml av cellösningen och späda den i steg, t.ex. först 4gånger, sedan 3 gånger, och till slut 10 gånger.
"De celler då har till ditt förfogande Finns i en flaska som innehåller 5 ml odlingsmedium med totalt 3 miljoner celler". Betyder ej 3 miljoner celler/ ml enligt min uppfattning utan (3*10^6celler/5ml). Eller?
Sarah Moha skrev:"De celler då har till ditt förfogande Finns i en flaska som innehåller 5 ml odlingsmedium med totalt 3 miljoner celler". Betyder ej 3 miljoner celler/ ml enligt min uppfattning utan (3*10^6celler/5ml). Eller?
Sorry jag har läst slarvigt hela tiden.
Det stämmer som du säger. Koncentrationen i den flaskan är då som du skrev, och därför stämmer så klart dina 0,833 ml.
My apology 🤗
Du försökte bara hjälpa mig och jag är tacksam för det.Fick många inställningar om hur jag kan lösa uppgiften under discussion.
Så tusen tack igen😍
För all del! Bra att det var användbart trots allt :)
