Beräkna kcat

Hej! Jag har löst a & b uppgiften men får fel svar för c och undrar vart jag tänkt fel

Problem 8 Hydrolysen av pyrofosfat till ortofosfat är viktig för att driva framåt biosyntetiska reaktioner såsom syntes av DNA. Denna hydrolytiska reaktion katalyseras i Escherichia coli av ett pyrofosfatas som har en massa på 120 kDa och består av sex identiska subenheter. För detta enzym definieras en aktivitetsenhet som den mängd enzym som hydrolyserar 10 μmol pyrofosfat (S) på 15 minuter vid 37°C under standardförhållanden. Det renade enzymet har ett Vmax på 2800 enheter per milligram enzym. 

(a) Hur många mol substrat hydrolyseras per sekund per milligram enzym när substratkoncentrationen är mycket större än KM?

[S]>>KM gäller Michaelis-Menten-ekvationen då gäller arbetar enzymet med sin maximala kapacitet (Vmax) pga. alla enzym aktiva ställen är mättade med substrat.

Metod: substrat hydrolys hastigheten per sekund per milligram enzym.

Steg 1: Vmax=2800 enheter per milligram enzym som den maximala hastigheten för den enzymatiska reaktioner

Steg 2: 1 aktivitets enhet, mängden enzym som hydrolyserar 10 μmol pyrofosfat på 15 minuter Vmax =2800 enheter per milligram enzym per 15 minuter.

Steg 3: Konvertera tiden till sekunder: 15 minuter = 900 sekunder.

Steg 4: Beräkna i enheter

Beräkna substrat hydrolys hastigheten per sekund per milligram enzym dividera Vmax/tiden. 2800 aktivitets enheter / 900 sekunder = 3,11 enheter per sekund per milligram enzym. 

Steg 5: Beräkna i koncentration

1 enhet hydrolysen av 10 μmol pyrofosfat är mängden substrat som hydrolyseras per sekund per milligram enzym 3,11 enheter x 10 μmol = 31,1 μmol pyrofosfat.

Svar✅: 31.1 μmol

(b) Hur många mol aktiva ställen finns det i 1 mg enzym? Antag att varje underenhet har en aktiv plats.

Svar✅: Enzymet: pyrofosfatas

Massa: 120 kDa~120.000 g/mol

Antal aktiva säten: 6 st 

6/120.000g/mol=0,0005g/mol

0,05μmol

(c) Vilket är enzymets kcat omsättningsnummer? 

Kcat=[E]T /Vmax

[E]T=120 kDa=120.000 g/mol

Vmax=2800 enheter/mg

Kcat=2800 mg/ 120.000 g/mol=2.3x10-5

Men facit: 622 s-1