Analysera mängd HER3-receptorer med flödescytometri
Hej, se:
Ni ska analysera mängden HER3-receptorer på ytan av en cancercell-linje (MCF7) med flödescytometri. Till er hjälp har ni en anti-HER3 IgG-antikropp från get samt en fluorofor-inmärkt anti-get-IgG antikropp från mus. Nämn en lämplig positiv kontroll samt en lämplig negativ kontroll samt förklara vilken information respektive kontroll ger
Den negativa kontrollen tänker jag ska vara ett prov där vi inte tillsatt anti-HER3 IgG-antikroppen. Detta prov förväntar vi oss ge ett negativt svar. Men jag vet inte vad en positiv kontroll skulle kunna vara... Typ ett prov med celler som vi 1) vet har (rikligt) med HER3 receptorer och 2) har tillsatt båda reagenser så att vi förväntar oss ett positivt svar.
Dina kontroller bör vara så lika dina prover som möjligt, med en varierad faktor, och kan då påvisa problem med just den varierade faktorn. Har du endast en kontroll men fler faktorer kanske det går att lista ut vilken faktor som ger upphov till ett avvikande resultat (t.ex. ingen signal). I idealfallet kan du använda fler kontroller och undersöka samtliga faktorer, men för etablerade förfarande behövs detta sällan.
Nu får du bara två kontroller, vilket begränsar en del men om dessa väljs lite klurigt kan flera faktorer kontrolleras samtidigt ändå...
Vilken information kan din föreslagna negativa kontroll (minus anti-HER3 IgG-antikroppen) ge?
En positiv kontroll skall per definition ge upphov till en signal som skiljer sig från bakgrunden, i detta fall i form av ökad fluorescensintensitet. Det verkar inte vara några begränsningar i uppgiften så vad kan du välja här?
